基于VIP/PACAP介导的肠道免疫功能失调探讨强的松治疗免疫性血小板减少症的效应机制

作者：车明璐; 严香; 王冬雨; 孙叙敏; 郎海燕; 黄子明; 何昊; 赵倩; 张雅月^*

来源：中国现代医学杂志, 2023, 33(21): 33-40.

• 免疫性血小板减少症
• 血管活性肠肽
• 肠道免疫
• 强的松

目的 通过检测脑、结肠、血清中血管活性肠肽（VIP）、垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）水平，探讨强的松治疗免疫性血小板减少症（ITP）的潜在机制。方法 BALB/c小鼠18只，SPF级，体重18～22 g，雌雄各半，采用全自动血细胞计数仪检测血小板计数，依据血小板计数采用区间分组法随机分为正常组、模型组及强的松组，每组6只。正常组注射生理盐水，模型组和强的松组注射抗小鼠血小板血清（APS）复制ITP动物模型。强的松组在模型复制第8天起开始强的松干预，正常组和模型组则予以生理盐水；注射APS前、注射后第4天、实验第8天（给药第1天）、实验第12天（给药第5天）、实验第15天（给药第8天）动态检测血小板计数；实验结束后采用酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测小鼠脑、结肠、血清中VIP、PACAP含量；用免疫组织化学法观察小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞P53蛋白表达的变化；原位末端转移酶标记法（TUNEL）检测小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡率的变化。采用ELISA检测小鼠脾脏中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)的水平。结果 与正常组比较，模型组及强的松组注射APS后，小鼠生命活力明显减弱，并于实验第8天出现皮肤渗血等现象；强的松组经药物干预后，小鼠饮食量和体重均增加，毛色恢复光亮，渗血点减少。实验各组小鼠注射APS前、注射后第4天、实验第8天（给药第1天）、实验第12天（给药第5天）、实验第15天（给药第8天）不同时间点的外周血小板计数比较：(1)不同时间点的外周血小板计数有差异（F=20.618,P=0.000）；(2)3组的外周血小板计数有差异（F=59.621,P=0.000）；(3)3组的外周血小板计数随时间变化趋势有差异（F=7.072,P=0.000）。与正常组比较，模型组小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞P53蛋白表达升高（P <0.05），淋巴细胞凋亡率升高（P <0.05）。与模型组比较，强的松组小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞P53蛋白表达降低（P <0.05），淋巴细胞凋亡率降低（P <0.05）。与正常组比较，模型组小鼠在脑、结肠、血清中VIP、PACAP水平均下降（P <0.05）；与模型组比较，强的松组小鼠在脑、结肠、血清中VIP水平均升高（P <0.05）；强的松组小鼠在脑、结肠中PACAP水平均升高（P <0.05）。与正常组比较，模型组小鼠脾脏中IFN-γ、IL-17A水平均升高（P <0.05）,IL-4、IL-10水平均下降（P <0.05）；与模型组比较，强的松组小鼠脾脏中IFN-γ、IL-17A水平均下降（P <0.05）,IL-4、IL-10水平均上升（P <0.05）。结论 基于VIP/PACAP调节肠道免疫功能可能是强的松治疗ITP的潜在机制之一。

• 单位
  西安医学院; 北京中医药大学东直门医院