饥饿诱导人胚肾细胞自噬模型的构建

作者：黄桢钧; 刘慰华; 钟赟; 刘少军

来源：新医学, 2015, 46(04): 221-224.

• 饥饿
• 自噬
• 自噬微管相关蛋白轻链3
• p62
• 双荧光检测

目的探讨饥饿诱导的人胚肾细胞(HEK293)自噬模型的构建。方法采用Earle’s平衡盐溶液(EBSS)分别处理HEK293细胞0、1、2、4、8 h,显微镜下观察细胞形态变化,蛋白免疫印迹法检测自噬微管相关蛋白轻链(LC)3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62的表达;双荧光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)质粒转染HEK293细胞24 h后,荧光显微镜观察EBSS饥饿条件下细胞内红色和绿色LC3荧光亮点的变化。结果饥饿处理后,HEK293细胞皱缩、变小变圆,蛋白免疫印迹法可检测到LC3的蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加;荧光显微镜可观察到细胞内红色和绿色LC3荧光亮点均增加。结论饥饿可成功诱导HEK293细胞自噬,表现为LC3蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的增加,以及荧光显微镜下细胞内红色和绿色LC3荧光亮点的增加。

• 单位
  广州医科大学附属第二医院