胎羊与成年绵羊原代肝细胞的分离培养与鉴定

作者：邹东敏; 刘若楠; 李睿文; 刘茂军; 段智变; 马玉忠^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(11): 1462-1467.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0176

• 绵羊
• 原代肝细胞
• 分离培养
• 鉴定

为了获得稳定、可持续传代的绵羊肝细胞,采集110～120 d的绵羊胚胎肝和正常未怀孕成年绵羊肝,用胶原酶两步灌流法分离肝细胞;用PAS染色法和CK-18免疫荧光法鉴定细胞;用CCK-8测定肝细胞第6、12、24、36、48、60、72和96小时的D450值,绘制生长曲线。结果显示,获得的绵羊原代肝细胞形态完整,贴壁良好,平均存活率为92%。PAS和CK-18荧光染色呈阳性,肝细胞纯度在95%以上。胎羊原代肝细胞可传代,成年绵羊肝细胞不可传代。由以上结果可知,将经典的Seglen两步原位胶原酶灌流法进行优化改良,可获得大量高纯度、高活性的绵羊原代肝细胞,胎羊肝细胞具有良好的活性,可满足需要大量肝细胞的体外试验研究。

• 单位
  山西农业大学; 江苏省农业科学院; 河北农业大学