mTOR自噬信号通路和凋亡在DEHP致SD尿道下裂胎鼠中的改变

作者：黄方圆; 周玥; 沈炼桔; 魏仪; 龙春兰; 唐向亮; 李典; 刘星; 魏光辉^*

来源：中华小儿外科杂志, 2018, 39(05): 383-388.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2018.05.013

• 尿道下裂
• 细胞凋亡
• 自噬
• DEHP

目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[Di(2-Ethylhexyl)Phthalate,DEHP]诱导大鼠发生尿道下裂的机制。方法 20只成年孕SD鼠[10～12周龄,体重(240±20g)]按照数字随机化法分为:正常对照组(n=10)和DEHP暴露组(750 mg·kg-1·d-1)(n=10),于妊娠期(gestation day,GD)第8.5～18.5日每日灌胃,于GD 19.5时剖宫取出胎鼠,以有无睾丸分辨雌雄,并在解剖显微镜下观察有无尿道下裂的发生。测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD)和肛门生殖指数(anogenital index,AGI),扫描电镜和HE染色观察阴茎组织形态改变,透射电镜观察阴茎组织内自噬的改变,western blot检测生殖结节(GTs)中自噬相关蛋白LC3、p62、Beclin1、Akt、mTOR、p-Akt、pmTOR和凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、Bax、Bcl2的表达水平,TUNEL法检测雄鼠GTs中细胞凋亡。结果 DEHP暴露后出现尿道下裂,发生率为27.58%,尿道下裂组中AGD、AGI均明显降低(P<0.05);尿道下裂雄鼠的GTs出现腹侧尿道缝融合障碍及尿道开口异位。尿道下裂组GTs中LC3和Beclin1的表达、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P<0.05),p62、p-AktSer473、p-mTORSer2448表达明显减少(P<0.05),Bcl2表达减少(P<0.05)cleaved-caspase3和Bax蛋白表达水平则明显增高(P<0.05),细胞凋亡显著增加(P<0.05)。结论 DEHP作为一个外源性干扰物进入机体后,致使胎鼠的GTs中PI3K/Akt/mTOR信号通路被抑制,自噬水平增加,同时促凋亡与抗凋亡系统失衡,进一步促进自噬的发生,最终使得凋亡异常增加,导致尿道下裂的发生。

• 单位
  重庆医科大学附属儿童医院