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摘要
目的 探讨RhD血型抗原的单链寡核苷酸（ssDNA）适配体对红细胞毒性的影响。方法 通过基因合成得到的2条全长82 bp ssDNA的RhD血型抗原适配体；收集5份EDTA抗凝全血，分别制备成4×10～7/mL的悬浮红细胞，均分为10管，各5管（100μL/管）标记为实验组：加入2条单特异性ssDNA全长序列（100 pmol/μL）各5μL;对照组：加入等量生理盐水。2组在37℃孵育洗涤60 min后，在LISS液中重悬，于4℃贮存。根据贮存时间不同将实验组和对照组进一步分为1 h、1 d、3 d、10 d、17 d共5个组（每组重复5个血液标本）;以FITC标记的Annexin V作为探针标记不同贮存时间LISS悬液中红细胞的磷脂酰丝氨酸（PS）,以Fluo-4标记不同贮存时间LISS悬液中红细胞的Ca2+。分别通过流式细胞仪检测不同保存时间LISS悬液中红细胞PS的外翻情况以及红细胞中Ca2+的变化。结果 光学显微镜镜检：孵育后的实验组未发生凝集，对照组发生凝集。流式细胞仪检测：2组间相同贮存时间悬浮红细胞的Annexin V-FITC染色细胞数相近（P>0.05）;实验组Annexin V细胞凋亡率（%）:贮存10 d时为6.06±1.38,明显高于贮存1 h（P0.05）;实验组Fluo-4 AM细胞凋亡率（%）贮存3 d、10 d、17 d分别为20.84±4.16、22.35±3.37、27.06±2.81（P<0.05）。结论 未发现ssDNA适配体对红细胞存在细胞毒性影响；RhD ssDNA适配体或有望成为检测及制备通用血的材料。
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单位深圳大学总医院; 深圳市龙华区人民医院; 汕头大学医学院
