LSD1过表达及去甲基化作用缺失质粒的构建与鉴定

作者：武莉莉; 刘艺洁; 曹冰雁; 费乔曼; 赵秀娟; 李倩; 韩雅婷; 曹磊; 杨冰; 张玲

来源：国际生物医学工程杂志, 2018, 41(01): 26-31+37.

• 赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1
• 去甲基化
• 重组质粒

目的评估赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(LSD1)过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在人胚肾细胞HEK293T中的表达水平。方法采用PCR扩增LSD1片段,重叠PCR扩增LSD1去甲基化作用缺失片段,构建大鼠特异性LSD1过表达质粒和ISD1去甲基化片段缺失质粒,并经琼脂糖凝胶电泳和测序进行验证。将验证后的两种重组质粒与空白载体分别进行包病毒,感染HEK293T后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞,再用Western Blot和实时定量PCR检测稳定表达的HEK293T细胞内LSD1的表达情况。结果琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明,LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒构建成功。Western Blot和实时定量PCR检测结果显示,与空白对照组相比,LSD1过表达组和LSD1去甲基化片段缺失组HEK293T细胞中LSD1蛋白及mRNA的相对表达量均上调,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。结论构建的LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在HEK293T细胞中实现了LSD1基因的过表达,为进一步研究LSD1基因与相关疾病的关系以及LSD1去甲基化作用奠定了基础。

• 单位
  天津医科大学; 基础医学院