金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药辅助基因femB的克隆和原核表达

作者：邹明祥; 武文君; 李军; 邬**; 张宁洁; 刘文恩; 范学工

来源：生命科学研究, 2012, 16(03): 223-227.

DOI：10.3969/j.issn.1007-7847.2012.03.007

• 金黄色葡萄球菌
• femB基因
• 基因克隆
• 融合蛋白

金黄色葡萄球菌femB基因与甲氧西林高水平耐药密切相关,可能成为开发抗MRSA药物的新靶位.以金葡菌基因组DNA为模板,PCR扩增femB全长基因,所得片段与pGM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆以PCR、双酶切及测序鉴定.将鉴定正确的目的片段定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中,转化至大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达GST/FemB融合蛋白;采用SDS-PAGE及Western blot对融合蛋白进行鉴定.结果显示,重组质粒在宿主菌中获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为75 kD,该融合蛋白可与抗GST-tag抗体特异结合;表明femB基因的原核表达系统构建成功,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.

• 单位
  基础医学院; 河南中医学院第一附属医院; 中南大学湘雅医院; 中南大学