非洲猪瘟病毒pE165R蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

作者：何健; 张梦杨; 刘阳坤; 姚伦广^*

来源：动物医学进展, 2023, 44(07): 10-15.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2023.07.004

• 非洲猪瘟病毒
• pE165R蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

为进一步深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV),原核表达ASFV pE165R蛋白并制备其多克隆抗体。根据ASFV Pig/HLJ/2018的pE165R基因序列(GenBank:MK333180.1),设计合成pE165R基因，并克隆到pET32a原核表达载体中，构建pET32a-pE165R重组质粒，经双酶切、测序验证后，转化到BL21(DE3)感受态细胞进行表达。通过SDS-PAGE、Western blot进行初步鉴定。将纯化的pE165R蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体，间接ELISA、Western blot及间接免疫荧光鉴定多克隆抗体的效价及特异性。结果显示成功表达了ASFV pE165R蛋白，且以可溶性形式大量表达。间接ELISA测得多克隆效价为1∶512 000;Western blot结果显示，在21 ku左右处出现了特异性条带，与预期值相符；间接免疫荧光结果显示出了特异性红色荧光，定位于细胞膜上，而对照组未出现红色荧光，表明制备的多克隆抗体能与重组杆状病毒表达的pE165R蛋白发生反应，且具有较好的特异性及反应原性。结果表明，表达、纯化获得了ASFV的pE165R重组蛋白，并成功制备了抗pE165R的多克隆抗体，为进一步研究pE165R蛋白生物学功能、非洲猪瘟疫苗、病毒感染机制等方面提供了物质基础。

• 单位
  南阳师范学院