超高效液相色谱-串联质谱法同时测定黑巧克力中4种牛奶过敏原蛋白

作者：刘晋源; 杨蕴嘉; 姚凯; 杨奕; 邵兵; 丁晓静^*

来源：卫生研究, 2022, 51(02): 286-292.

DOI：10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2022.02.018

• 巧克力
• 过敏原蛋白
• 超高效液相色谱-串联质谱
• 牛奶蛋白

目的 建立黑巧克力中4种牛奶过敏原蛋白的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法 从Uniprot数据库筛选牛奶主要过敏原蛋白的特异肽段，用Skyline工具模拟胰酶酶切，确定各肽段的多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)方法。50 mmol/L碳酸氢铵(含2 mol/L尿素)提取巧克力中目标蛋白，14 000 r/min、4℃离心除脂，胰酶酶解上清液，固相萃取柱净化，Peptide BEH C18(130?,2.1 mm×100 mm, 1.7μm)色谱柱分离，以乙腈和水[均含0.1%(V/V)甲酸]为流动相进行梯度分离，标准加入法定量。结果 4条特异肽段FFVAPFPEVFGK、NAVPITPTLNR、AVPYPQR和ALPMHIR可分别作为αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白、β-乳球蛋白的定量肽段。其质量浓度与质谱响应峰面积呈现良好线性关系(R2>0.99),方法的检出限和定量限分别为50～100和160～350μg/kg,加标回收率为60.6%～116.7%,相对标准偏差均小于20%(n=6)。结论 该方法灵敏、准确、高效，适于检测黑巧克力中4种牛奶过敏原蛋白。

• 单位
  北京市疾病预防控制中心; 食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室; 北京市预防医学研究中心; 公共卫生学院; 首都医科大学