制备小鼠去细胞拟胚体对Lewis肺癌细胞的促分化作用

作者：吕卫东; 蔡琳; 张家东; 雷光焰; 刘志刚; 张新伟; 陆建荣

来源：中国组织工程研究, 2016, 20(20): 2972-2978.

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• 癌,Lewis肺
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• Lewis肺癌细胞
• 生物材料
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• 三维培养
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背景:胚胎干细胞或胚胎组织与癌细胞共培养,能够诱导癌细胞分化为正常上皮细胞或恶性程度降低,而去细胞拟胚体保留了胚胎组织的结构和重要细胞因子。目的:成功制备一种来源于小鼠胚胎干细胞的去细胞拟胚体,探讨去细胞拟胚体在小鼠Lewis肺癌细胞体外三维培养中的作用。方法:先将小鼠胚胎干细胞(D3)动态培养7 d后形成拟胚体,然后用十二烷基硫酸钠进行去细胞处理。小鼠Lewis肺癌细胞与去细胞拟胚体三维共培养7 d,对照组肺癌细胞在Matrigel上三维培养7 d。Ki67免疫组化染色检测细胞增殖情况,Western blot检测Paxillin,E-cadherin蛋白表达水平,RT-PCR检测Slug和E-cadherin mR NA表达水平。结果与结论:(1)实验成功制备一种大小均匀的小鼠拟胚体,经十二烷基硫酸钠去细胞处理后,拟胚体的细胞成分完全去除;(2)小鼠Lewis肺癌细胞在Matrigel上三维培养7 d后形成球形的肿瘤多细胞球体,Ki67免疫组化染色阳性细胞比例高;小鼠Lewis肺癌细胞在去细胞拟胚体支架上三维培养7 d,可见肺癌细胞长入拟胚体,但Ki67阳性细胞比例明显降低;(3)相对于Matrigel组,去细胞拟胚体组的Paxillin吸光度小于Matrigel组(P<0.05),而E-cadherin吸光度大于Matrigel组(P<0.05);(4)去细胞拟胚体组的Slug m RNA表达明显低于Matrigel组(P<0.05),而E-cadherin mR NA表达高于Matrigel组(P<0.05);(5)结果表明,去细胞拟胚体对小鼠Lewis肺癌细胞在体外三维培养有促进分化作用。

• 单位
  陕西中医学院附属医院; 陕西省肿瘤医院