3~* Flag-hSesn1重组质粒的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达

作者：沈涛; 郭然; 李妍; 巴根; 杨蕾; 郭洲洋; 陈之光; 付勤

来源：现代肿瘤医学, 2017, 25(09): 1353-1356.

DOI：10.3969/j.issn.1672-4992.2017.09.004

• hSesn1
• Western blot
• 免疫沉淀

目的:构建3~*Flag-hSesn1真核表达载体并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以GSThSesn1为模板,利用聚合酶链反应扩增hSesn1基因c DNA全长,并将其克隆至3~*Flag标签的真核表达载体中。将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到MG-63骨肉瘤细胞中,提取总蛋白进行Western blot检测。进一步利用共聚焦激光显微镜观察3~*Flag-hS esn1在MG-63细胞中的定位,使用免疫沉淀的方法纯化人源Sesn1蛋白。结果:hS esn1基因的cD NA全长成功构建到3~*Flag标签的真核表达载体中,Western blot检测到了含有Flag标签的人源Sesn1融合蛋白表达,且在MG-63骨肉瘤细胞中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化人源Sesn1蛋白。结论:成功构建了3~*Flag-hS esn1真核表达质粒,同时鉴定了其融合蛋白的表达,并纯化人源Sesn1蛋白。3~*Flag-hS esn1蛋白主要定位在细胞质,部分定位于细胞核周。

• 单位
  基础医学院; 中国医科大学; 中国医科大学附属盛京医院