寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒三重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者：赖丽金; 李阿茜; 张全福; 孙丽娜; 李川; 芜为; 王芹; 梁米芳; 李德新; 韦艳^*; 李建东^*

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2019, 33(06): 632-636.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2019.06.015

• 寨卡病毒
• 基孔肯雅病毒
• 马雅罗病毒
• RT-PCR

目的建立一种可以同时鉴别寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒的检测方法。方法通过全球共享数据库中检索下载寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒全基因组序列进行比对分析, 估计其保守区, 确定靶基因位置, 针对这3种病毒分别设计特异性引物和探针, 建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法, 对方法的特异性、灵敏性和重复性进行评估。结果所建立实时荧光定量RT-PCR检测方法可检出寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒模拟样本, 最低检出限分别为寨卡病16.22拷贝/PCR, 基孔肯雅病毒12.02拷贝/PCR, 马雅罗病毒体外转录RNA为2.82拷贝/PCR, 三重组合检测与3种病毒分别单重检测, 灵敏度无明显差别。与登革病毒、汉坦病毒、SFTS病毒、黄热病毒和流感病毒等无交叉反应, 检测100份健康人体检血清样本未见非特异性反应, 特异性为100%。重复性结果显示, 通过选取高、中、低3个不同浓度梯度的病毒核酸或体外转录RNA, 3种病毒的标准差均控制在0.5以内, 变异系数在2%以下。结论建立了寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法, 该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。

• 单位
  贵州医科大学; 公共卫生学院; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所