科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
【目的】了解并掌握新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus, NDRV)流行特点及生物学特性，为NDRV的防治提供理论基础和技术支持。【方法】采集河北某鸭场疑似发生鸭呼肠孤病毒感染的组织，无菌处理后接种SPF鸡胚分离病毒，收获第3代尿囊液进行血凝试验，通过PCR、透射电镜观察、间接免疫荧光法(IFA)鉴定病毒，对分离得到的病毒进行体外细胞培养和动物回归试验，并采用Mega 7.0对其σC基因进行遗传进化分析。【结果】分离得到的病毒不能凝集鸡红细胞，可致死鸡胚，死亡鸡胚出血、充血严重；经PCR鉴定，病毒呈NDRV阳性，其他病原(禽呼肠孤病毒、鸭病毒性肝炎、鸭坦布苏病毒、鸭瘟病毒、禽腺病毒血清4型)均呈阴性，将分离得到的病毒命名为BD/CHN/2020株；病毒纯化后，经电镜观察可见直径为60～80 nm、无囊膜的球形病毒粒子，该毒株可在BHK和LMH细胞上稳定增殖并产生细胞融合的细胞病变效应(CPE);IFA结果显示，BD/CHN/2020株接种BHK细胞后在激光共聚焦显微镜下观察可见特异性绿色荧光；BD/CHN/2020株经皮下接种后，发病鸭出现精神沉郁、排白色稀粪等临床症状，剖检可见脾脏出血、肿大、有白色坏死灶等病理变化；序列比对发现，BD/CHN/2020株与NDRV毒株(TH11、091等毒株)在同一分支，与NDRV SY株核苷酸和氨基酸序列相似性最高，均为99.7%,属于NDRV。与灭活疫苗TH11株(KC493571.1)和弱毒疫苗JS01-105P株(V202168)相比，BD/CHN/2020株第93、120、132、158、253、298位氨基酸处发生了位点突变。【结论】成功分离得到1株NDRV BD/CHN/2020株，分离毒株对北京鸭有较强的致病性，与国内疫苗株相比，BD/CHN/2020株的σC蛋白已经发生了氨基酸位点的突变，结果可为新型鸭呼肠孤病毒病的流行病学及疫苗研发奠定基础。
- 单位
