基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究双氢青蒿素对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的影响

作者：朱海洋; 孙会卿; 张淑凤; 吴贺文

来源：中医学报, 2022, 37(04): 830-836.

DOI：10.16368/j.issn.1674-8999.2022.04.153

• 肝癌
• 双氢青蒿素
• 细胞自噬
• PI3K/AKT/mTOR信号通路

目的：研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin, DHA)对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的影响，并初步探讨其作用机制。方法：采用不同浓度(0μmol·L-1、6.25μmol·L-1、12.5μmol·L-1、25μmol·L-1、50μmol·L-1、100μmol·L-1)DHA分别作用于SMMC-7721细胞24 h、48 h、72 h后，MTT法检测DHA对细胞增殖的影响，计算DHA对SMMC-7721细胞的半抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC50),并于显微镜下观察细胞形态变化；SMMC-7721细胞随机分为对照组、DHA组、抑制剂组、激动剂组，DHA组以IC50剂量的DHA干预细胞，抑制剂组采用5 mmol·L-1 3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)与IC50剂量的DHA干预细胞，激动剂组采用100μg·L-1激动剂胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)与IC50剂量的DHA干预细胞，对照组采用常规培养基干预细胞，培养48 h后，采用透射电镜及MDC染色观察细胞自噬情况；Western Blot检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositide 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路相关蛋白及自噬相关蛋白的表达水平。结果：不同浓度DHA干预SMMC-7721细胞24 h、48 h、72 h后，细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),细胞形态发生改变，且呈剂量和时间依赖性；与对照组比较，DHA组和抑制剂组可诱导SMMC-7721细胞自噬，PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-I和Beclin1蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与DHA组、抑制剂组比较，激动剂组SMMC-7721细胞自噬减弱，PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-I和Beclin1蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。结论：DHA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖，促进SMMC-7721细胞自噬，其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

• 单位
  河南省人民医院; 郑州大学第五附属医院