大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶的原核表达、纯化及其酶活动态监测

作者：张晓; 吴永红; 何国维; 刘虎岐; 张成岗

来源：西北农业学报, 2012, (05): 32-36.

• 甘油醛3-磷酸脱氢酶
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 酶活动态扫描 Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase
• Prokaryotic expression
• Protein purification
• Enzyme activity

利用大肠杆菌原核表达系统高效表达大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶,并结合蛋白分离纯化技术获得高纯度样品,动态监测其酶活。通过RT-PCR技术,扩增PC12细胞中甘油醛3-磷酸脱氢酶编码序列并亚克隆到原核表达载体pET28b;鉴定正确后,转化入大肠杆菌BL21(DE3)细胞并采用诱导剂IPTG(终浓度1mmol/L)诱导表达,表达产物采用15% SDS-PAGE鉴定,用镍柱对蛋白进行纯化及脱盐;最后将分离纯化产物在体外进行甘油醛3-磷酸脱氢酶酶活动态分析。结果表明,成功构建大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶的原核表达载体pET28b-G3PDH;高效表达甘油醛3-磷酸脱氢酶,表达产物占总蛋白35%,且发现表达产物...

• 单位
  军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 生命科学学院; 蛋白质组学国家重点实验室; 西北农林科技大学