利用TaqMan探针检测大鼠心肌细胞钙调磷酸酶Aβ基因表达方法的建立

作者：栾颖; 李学奇; 曹威; 尹新华; 童光志

来源：中国地方病学杂志, 2006, (04): 447-449.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1000-4955.2006.04.029

• TaqMan探针
• 荧光定量PCR
• 钙调磷酸酶
• 基因表达

目的利用TaqMan探针,建立多重荧光定量PCR方法检测大鼠心肌细胞内钙调磷酸酶A (calcineurin A,CaN A)β基因表达水平的方法,为进一步研究钙调磷酸酶在钙-钙调素-钙调磷酸酶信号转导途径中的分子生物学作用打下基础。方法根据GeneBank提供的大鼠CaN Aβ和β-肌动蛋白(β-actin)基因序列,分别设计并合成特异的引物和TaqMan探针。将:PCR扩增的CaN Aβ和β-actin基因片段克隆入pMD18-T载体,重组质粒pMDT-CaN Aβ和pMDT-β-actin,经筛选、鉴定和测序后,作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测;ROX和FAM标记的TaqMan探针对CaN Aβ和β-actin基因表达进行定量,用β-actin基因表达结果校正CaN Aβ;取培养的大鼠心肌细胞,RT-PCR方法测定细胞内CaN Aβ基因表达。结果应用重组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0．99;与定量对照曲线比较,大鼠心肌细胞内CaN Aβ表达量是β-actin的90％。结论成功建立了利用TaqMan探针检测CaN Aβ和β-actin基因的多重荧光定量PCR方法及标准曲线。

• 单位
  哈尔滨医科大学附属第四医院; 哈尔滨医科大学附属第二医院; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所