沉默GTPBP4基因表达对食管癌细胞增殖、侵袭和化疗敏感性影响

作者：张翠红; 吕欣; 侯春立; 张建军; 马博敬; 范才^*

来源：肿瘤预防与治疗, 2021, 34(03): 190-198.

• 食管癌
• 人类GTP结合蛋白4
• RNA干扰
• 慢病毒
• 增殖
• 化疗敏感性

目的:探讨沉默GTPBP4基因表达对人食管癌EC109细胞生长、侵袭及化疗药物敏感性的影响。方法:通过GEO数据库,分析食管癌患者组织中GTPBP4 mRNA的表达水平;利用慢病毒(LV-GTPBP4-siRNA组)及阴性病毒(LV-NC组)转染食管癌EC109细胞后,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测GTPBP4基因表达沉默效果,然后采用CCK8法、流式细胞法、Transwell小室实验分别检测GTPBP4基因表达沉默后EC109细胞增殖、周期分布、侵袭能力及化疗敏感性变化。结果:GEO数据库分析表明GTPBP4 mRNA在人食管癌组织中的表达明显高于正常邻近食管组织(P<0.001)。EC9706、EC109和KYSE-150细胞GTPBP4 mRNA相对表达水平分别为2.66±0.32、4.62±0.06、3.38±0.17,明显高于HEEC细胞(均P<0.001);EC9706、EC109和KYSE-150细胞GTPBP4蛋白相对表达水平分别为2.46±0.56、3.95±0.36、3.18±0.10,明显高于HEEC细胞(P<0.01,P<0.001,P<0.001)。LV-GTPBP4-siRNA病毒转染后EC109细胞中GTPBP4 mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05,P<0.001)。GTPBP4基因表达沉默后,EC109细胞的生长受到明显抑制(P<0.001),且加入不同浓度顺铂和5-氟尿嘧啶处理细胞后,细胞的存活率和药物半数抑制浓度(50%inhibiting concentration, IC50)均降低(均P<0.05);同时G0/G1期细胞所占比例明显升高,S期细胞所占比例降低(均P<0.001);并且GTPBP4基因表达沉默及联合化疗药物顺铂处理使EC109细胞的穿膜细胞数量明显减少,侵袭能力降低(P<0.001,P=0.001)。结论:人食管癌组织中GTPBP4 mRNA的表达明显高于正常邻近食管组织。LV-GTPBP4-siRNA慢病毒载体可有效抑制食管癌EC109细胞中GTPBP4基因的表达,从而抑制细胞增殖及侵袭能力,增强人食管鳞癌细胞对化疗药物的敏感性。