一种高效稳定的磷酸钙转染293T细胞方法的建立及评价

作者：华进; 程志彬; 林春霖; 戴起宝; 朱广伟^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2019, 45(05): 1177-1198.

DOI：10.13481/j.1671-587x.20190535

• 磷酸钙转染
• 293T细胞
• 肿瘤坏死因子受体相关因子6
• flag蛋白

目的:探讨2种磷酸钙转染法转染293T细胞的效果,建立一种实现高效稳定磷酸钙转染293T细胞的方法。方法:荧光显微镜观察采用2种磷酸钙转染方法 (传统磷酸钙转染法和改良磷酸钙转染法)转染pCDHGFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞的转染效率。采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测2种磷酸钙转染方法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞后,肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)mRNA和flag蛋白表达水平。结果:荧光显微镜下观察,与传统磷酸钙转染法比较,改良磷酸钙转染法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48h后的转染效率明显升高(P<0.01);Real-time PCR法和Western blotting法检测,与传统转染方法比较,磷酸钙转染改良法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48h后,TRAF6mRNA和flag蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:本研究建立的改良磷酸钙转染方法是一种高效、稳定的DNA转染方法。

• 单位
  福建医科大学; 福建医科大学附属第一医院