应用高效体积排阻色谱偶联多角度激光散射鉴定猪圆环病毒2型灭活疫苗及病毒样颗粒疫苗抗原

作者：徐嫄; 杨延丽; 邹兴启; 李翠; 朱元源; 秦义娴; 李琰; 盛亚男; 刘业兵; 彭国瑞; 徐小艾; 张松平; 赵启祖

来源：生物工程学报, 2022, 38(08): 2948-2958.

DOI：10.13345/j.cjb.210937

• 猪圆环病毒2型
• Cap蛋白
• 病毒样颗粒
• 疫苗
• 高效体积排阻色谱
• 多角度激光散射

本文旨在建立基于高效体积排阻色谱(high-performance size-exclusion chromatography,HPSEC)偶联多角度激光散射仪(multi-angle laser light scattering,MALLS)的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)疫苗抗原检测方法。以纯化的PCV2灭活病毒及病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)为参照，对4家生产企业的2种PCV2灭活病毒疫苗(a、b)及VLP疫苗(c、d)破乳后进行HPSEC-MALLS检测及分子量分析；结合PCV2抗原检测卡、Western blotting和透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)，鉴定了特征色谱峰；考察了方法的重复性和检测线性。结果表明，两家企业生产的PCV2灭活病毒疫苗破乳液水相经HPSEC分离，在保留时间约13.3 min处出现抗原特征峰；MALLS计算该色谱峰分子量分别为2.61×10～6 (±4.34%) Da和2.40×10～6 (±2.51%) Da。两种VLP疫苗也在13.3 min处出现抗原特征峰，分子量分别为2.09×10～6 (±2.94%) Da和2.88×10～6 (±11.85%) Da，接近PCV2的理论分子量；同时在保留时间约11.4 min处也出现色谱峰，经检测分子量为4.37×10～6 (±0.42%) Da,TEM表征显示为VLP二聚体。取疫苗d和PCV2 VLP纯品进行重复检测，抗原色谱峰面积的RSD (n=3)均小于1.5%，重复性好；将PCV2 VLP纯品梯度稀释检测，VLP及其多聚体的色谱峰面积与浓度均呈良好的线性关系，R2分别为0.999及0.997，能够满足定量及多聚体含量分析。该方法有望成为一种准确、高效的PCV2疫苗的体外评价方法，用于质量评价与提升。

• 单位
  中国科学院过程工程研究所; 中国兽医药品监察所; 中国科学院大学; 生化工程国家重点实验室