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摘要
靶向金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）保守基因（nuc）序列设计特异性引物，经引物筛选和反应条件的优化，建立金黄色葡萄球菌的重组酶等温扩增（recombinase aided amplification,RAA）结合侧流层析试纸条（lateral flow dipstick,LFD）的快速检测方法。该方法在引物浓度200 nmol/L、33℃反应20 min即可实现靶标基因片段的有效扩增。特异性分析结果表明RAA-LFD方法检测金黄色葡萄球菌与其他常见致病菌菌株间不存在交叉反应，灵敏度分析结果表明RAA-LFD方法检测金黄色葡萄球菌的检出限为4 fg/μL(DNA)与1.83×102 CFU/mL（纯菌液）。用人工污染牛奶样品验证RAA-LFD方法的可靠性，结果显示在增菌6 h时，RAA-LFD方法可检测到1.83×101 CFU/mL金黄色葡萄球菌。分别采用微生物生化鉴定法、PCR法与RAA-LFD方法对64份牛奶样品进行金黄色葡萄球菌检测，结果表明，RAA-LFD方法与微生物生化鉴定法总符合率为95.3%，与PCR法总符合率（98.4%）表现出较高的一致性。本研究建立的可视化检测方法具有特异性强、灵敏度高、快速高效、操作简单、检测结果直观、对仪器设备要求低等特点，为牛奶中金黄色葡萄球菌的检测提供新的发展方向。
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