副溶血性弧菌实时重组酶聚合酶扩增检测技术研究

作者：占利; 徐昌平; 张云怡; 陈鸿鹄; 张政; 陈建才; 张俊彦; 梅玲玲^*

来源：预防医学, 2019, 31(07): 653-657.

DOI：10.19485/j.cnki.issn2096-5087.2019.07.002

• 副溶血性弧菌
• 重组酶聚合酶扩增技术
• 检测
• tlh基因

目的建立快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增技术(RPA)。方法根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立检测副溶血性弧菌的实时RPA方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价方法灵敏度,通过检测不同种属弧菌及其他细菌标准株评价方法特异度,通过重复试验评价方法稳定性,通过实样检测评价方法应用效果。结果建立的实时RPA方法在39℃恒温下20 min内完成副溶血性弧菌扩增,最低检测限为5 pg/反应,与其他致病菌无交叉反应,不同浓度的副溶血性弧菌DNA模板和大肠杆菌DNA模板隔日3次实时RPA检测结果一致,实时RPA对51份鲜活/冰鲜鱼、虾、贝、蟹类样品的检测结果与GB 4789.7—2013 《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》检测结果一致。结论建立的实时RPA方法可定性检测副溶血性弧菌,且实验操作及结果判读简单,适用于突发公共卫生事件、食品安全监管中的副溶血性弧菌快速检测。

• 单位
  浙江省疾病预防控制中心