本发明涉及生物工程领域,尤其涉及重组载体、构建方法、宿主及应用。本发明提供了重组载体,包括:AaCPR100A基因、正向启动子和反向启动子;所述AaCPR100A基因具有:如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列;和所述正向启动子具有:如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列;和所述反向启动子具有:如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。本发明利用无缝克隆技术构建围绕靶基因的双启动子表达载体,构建了表达dsRNA的苏云金芽孢杆菌工程菌。