猪盖他病毒衣壳蛋白的原核表达、纯化和多克隆抗体的制备

作者：姜焱; 何丹妮; 张小敏; 周斌; 陈溥言

来源：病毒学报, 2013, (04): 371-375.

• 猪盖他病毒
• 衣壳蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体 Porcine Getah virus
• Capsid Protein
• Prokaryotic Expression
• Polyclonal antibody

原核表达猪盖他病毒(Getah virus)衣壳蛋白(Cap)并制备多克隆抗体。设计一对特异性引物,从含有Cap基因的pT-Cap质粒中扩增全长Cap基因,克隆至携带有His标签的原核表达载体pColdⅠ中,通过PCR、酶切鉴定和序列测定后,重组质粒pCold-Cap转化大肠杆菌Rosetta 2,IPTG诱导后SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白;蛋白经镍柱纯化后切胶免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体。实验表明:经终浓度0.1mmol/L IPTG 15℃诱导24h后,Cap基因在Rosetta 2中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的40.2%,SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量为32.3kD。Western blot显示制备的鼠源抗血清可以与融合蛋白发生反应,有明显的特异性条带。猪盖他病毒衣壳蛋白原核表达成功,制备的多抗可以识别Cap蛋白。

• 单位
  江苏出入境检验检疫局; 南京农业大学