双峰驼TLR10基因的原核表达、抗体制备及组织分布

作者：曾巍巍; 张睿; 谢东旭; 索南吉; 王亭玮; 刘柯江; 王雯慧^*

来源：农业生物技术学报, 2023, 31(10): 2123-2131.

• 双峰驼
• Toll样受体10 (TLR10)
• 原核表达
• 抗体制备
• 免疫组织化学

Toll样受体10 (toll-like receptors 10, TLR10)在病原微生物进入机体后能与配体迅速结合并促进各种免疫细胞活化，在免疫系统中扮演着重要角色，但在机体不同组织器官的表达特点需进一步探究。本研究以NCBI中收录的双峰驼(Camelus bactrianus) TLR10基因(GenBank No. XM＿010962682.2)构建pET-28a-TLR10原核表达质粒，在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达TLR10重组蛋白，并用纯化后的蛋白制备双峰驼TLR10多克隆抗体，通过ELISA和Western blot测定抗体的效价和特异性，采用免疫组织化学法观察TLR10在双峰驼心、肝、脾、肺和肾中的表达特征。结果显示，双峰驼TLR10重组蛋白大小为50 kD，主要以包涵体形式表达，免疫日本大耳兔(Oryctolagus cuniculus)后获得的抗体效价为1∶32 000，原核表达的TLR10蛋白能与该抗体特异性结合；免疫组化结果显示，TLR10主要在双峰驼心肌细胞、肝细胞及枯否细胞、脾脏的单核/巨噬细胞、肺脏的支气管上皮细胞、Ⅱ型肺泡细胞和尘细胞以及肾脏的肾小管上皮细胞表达。本研究为进一步揭示TLR10蛋白的功能及其在双峰驼天然免疫和获得性免疫中发挥的生物学作用提供材料。

• 单位
  甘肃农业大学