稳定转染小鼠IL-17全长基因的乳腺癌细胞株的建立及基因转染对4T1细胞的影响

作者：杨丽娟; 赵莎; 张海谱; 姚智燕; 胡洁; 单保恩

来源：军事医学, 2012, 36(08): 603-607.

• 白细胞介素17
• 转染
• 乳腺肿瘤

目的建立稳定转染小鼠IL-17基因全长的小鼠乳腺癌4T1细胞株,并进行鉴定。方法脂质体法将携带小鼠IL-17基因全长的真核表达载体pcDNA3.1转染小鼠乳腺癌细胞4T1,经G418筛选出稳定表达IL-17的细胞株;镜下观察细胞形态,RT-PCR法、Western印迹和激光共聚焦法检测目的基因和蛋白的表达;收集转染和未转染IL-17的4T1细胞的培养上清,分别与巨噬细胞RAW264.7共培养,ELISA法检测RAW264.7细胞培养上清中IL-6水平;MTS法检测细胞的增殖情况,流式细胞技术检测细胞周期、凋亡以及细胞表面MHCⅠ、MHCⅡ、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)等分子表达。结果获得1株稳定表达IL-17的4T1细胞,而且其培养上清可刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7产生IL-6,证明该细胞可表达功能性IL-17。结论成功建立了稳定转染IL-17基因的小鼠乳腺癌细胞株。

• 单位
  中国人民解放军白求恩国际和平医院; 河北医科大学; 基础医学院; 河北医科大学第四医院