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摘要
禽致病性大肠杆菌能够引起禽的大肠杆菌病，对我国养禽业造成严重的经济损失。利用生物信息学方法，分析QseC蛋白的跨膜区域、信号肽、抗原性及亚细胞定位，设计表达引物，以APCE110菌株为模板进行PCR扩增，构建重组表达质粒pColdI-QseC并转化至大肠杆菌感受态BL21（DE3）中诱导蛋白的表达和纯化，重组蛋白QseC与抗QseC小鼠血清和血清型为O1、O2、O78的APEC康复血清进行Western blot试验，检测其免疫原性和反应原性。用C-ImmSim、ClusPro分别进行免疫模拟和蛋白-Toll样受体的分子对接，验证QseC蛋白的免疫效果和蛋白与Toll样受体分子之间的结合模式。结果显示QseC蛋白是细菌的胞质跨膜蛋白，其中膜内区共编码183个氨基酸，膜外区共编码208个氨基酸，氨基酸序列中无信号肽，抗原性为0.5。成功构建表达质粒并在上清中表达，经纯化浓度为0.8 mg/mL。Western blot结果显示，QseC能与抗QseC小鼠血清和不同血清型的APEC康复血清产生特异性条带，表明QseC蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。C-ImmSim免疫模拟显示，在3、10、17日龄进行免疫能够诱导宿主机体产生适应性免疫和记忆免疫，并在25日龄左右抗体效价达到最高值。分子对接结果显示QseC蛋白与TLR2、TLR4和TLR5受体都具有较高的亲和力。本试验成功构建了pColdI-QseC表达质粒并纯化获得QseC蛋白，验证其具有良好的免疫原性和反应原性，同时，与TLR2、TLR4和TLR5受体都具有较高的亲和力。为APEC亚单位疫苗研发提供参考。
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