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摘要
目的探讨mtDNA氧化损伤在人视网膜血管内皮细胞(hRECs)高糖代谢记忆过程中的作用。方法选择30 mmol·L-1葡萄糖作为作用浓度,含浓度为5.5 mmol·L-1葡萄糖的DMEM培养基作为正常培养基。将hRECs分为4组:空白对照组对hRECs不做特殊处理,用正常培养基培养;高糖诱导3 h组用高糖作用hRECs 3 h,高糖诱导12 h组用高糖作用12 h,高糖诱导24 h组用高糖作用24 h,之后均转至正常培养基培养2 d。采用流式细胞仪检测hRECs细胞凋亡情况及hRECs内活性氧自由基(ROS)含量,Western blot检测hRECs细胞色素C蛋白表达,实时荧光定量PCR检测线粒体呼吸链复合物COX1 mRNA的表达,ELISA法检测hRECs线粒体内mtDNA氧化损伤标志物8-OHdG含量。结果流式细胞仪检测结果显示,对照组细胞凋亡率为6.94%。高糖诱导3 h组、12 h组及24 h组细胞凋亡率分别为10.30%、12.08%、13.55%;高糖诱导24 h组细胞凋亡率高于高糖诱导12 h组,差异有统计学意义(P<0.05),高糖诱导12 h组细胞凋亡率高于高糖诱导3 h组,差异有统计学意义(P<0.05);各高糖诱导组细胞凋亡率均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot结果显示,各高糖诱导组细胞线粒体氧化损伤相关蛋白细胞色素C相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);高糖诱导3 h组细胞色素C相对表达量低于12 h组和24 h组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。高糖诱导3 h组COX1 mRNA相对表达量高于12 h组和24 h组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);各高糖诱导组COX1 mRNA相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。各高糖诱导组细胞ROS含量高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);高糖诱导3 h组ROS含量低于12 h组,差异有统计学意义(P<0.05);高糖诱导12 h组ROS含量低于24 h组,差异有统计学意义(P<0.05)。各高糖诱导组线粒体氧化损伤标志物8-OHdG含量高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);高糖诱导24 h组8-OHdG含量高于12 h组及3 h组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论高糖下视网膜血管mtDNA氧化损伤可能是"高糖损伤"解除后氧化损伤可持续存在的"源动力"。
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