2型猪链球菌细胞分裂蛋白GpsB的原核表达及其鉴定

作者：侯红芬; 张会芳; 胡丹; 郑峰; 朱旭辉; 王长军; 潘秀珍^*; 曹祥荣^*

来源：中国人兽共患病学报, 2019, 35(03): 201-205.

• 2型猪链球菌
• GpsB
• 原核表达
• 多克隆抗体

目的利用原核表达系统诱导表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,S.suis 2)分裂相关因子GpsB重组蛋白,为后续研究奠定基础。方法以S.suis 2菌株05ZYH33全基因组DNA为模板,经PCR扩增得到目的基因片段。目的基因经双酶切后连接至表达载体pET32a,转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)DH5α感受态细胞。重组质粒经测序鉴定正确后转化E.coli BL21感受态细胞。获得的重组表达菌经IPTG诱导表达目的蛋白。利用Ni离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。利用重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果成功构建出重组表达载体pET32agpsB,并经IPTG诱导表达出目的蛋白。重组蛋白主要存在于表达菌裂解液上清中,分子质量约30 kD,与预期大小一致。Western blot检测发现,该蛋白能被His-Tag单克隆抗体特异性识别。制备的多克隆抗体能特异性识别重组GpsB蛋白(rGpsB)。结论成功表达和纯化了rGpsB并获得了该蛋白的多克隆抗体,为进一步研究该蛋白在S.suis 2分裂过程中的作用鉴定了基础。

• 单位
  南京师范大学; 南京军事医学研究所; 生命科学学院