多房棘球蚴蛋白TSP3的原核表达及分离纯化

作者：刁晓艳; 周虎; 李润乐; 彭海; 李子安; 汤锋^*; 杨全余^*

来源：中国高原医学与生物学杂志, 2018, 39(03): 191-196.

DOI：10.13452/j.cnki.jqmc.2018.03.009

• 多房棘球蚴
• 蛋白
• TSP3
• 表达
• 分离
• 纯化

目的构建适合融合基因pCzn1-TSP3的原核表达系统,纯化获得多房棘球蚴蛋白TSP3。方法 TSP3的基因序列在GenBank中获取,采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法,构建原核表达质粒pCzn1-TSP3,并转化于大肠杆菌Arctic Express(DE3)中,经IPTG诱导,获得目的蛋白,利用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化获得目的蛋白。结果经生物公司测序及酶切鉴定结果证明重组质粒p Czn1-TSP3构建成功。进一步实验结果表明TSP3在原核表达系统中主要以可溶蛋白形式存在。继而经Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化获得TSP3纯蛋白,并经过Western Blot证实。结论大肠杆菌Arctic Express(DE3)中能够成功表达蛋白TSP3,且Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱能够纯化目的蛋白TSP3。

• 单位
  青海省人民医院; 青海大学附属医院; 青海大学