miR-425-5p靶向TGF-β1/Smad2信号通路减少小鼠增生性瘢痕组织胶原纤维沉积

作者：梁艳; 王丽娟; 吴惠林^*

来源：基础医学与临床, 2023, 43(03): 393-401.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2023.03.393

• 增生性瘢痕
• miR-425-5p
• 胶原沉积
• 转化生长因子-β1
• Smad2

目的 探究miR-425-5p在增生性瘢痕(HS)形成中的作用及机制。方法 通过RT-qPCR和Western blot检测了16对HS组织和正常皮肤组织中miR-425-5p、转化生长因子-β1(TGF-β1)和SMAD家庭成员2(Smad2)的水平。将成纤维细胞分为9组：对照组(control组)、miR-425-5p-mimic组、NC-mimic组、miR-425-5p-inhibitor组、NC-inhibitor组、TGF-β1-pcDNA3.1组、NC-pcDNA3.1组、miR-425-5p-mimic+NC-pcDNA3.1组和miR-425-5p-mimic+TGF-β1-pcDNA3.1组，并采用Lipofectamine 2000对细胞进行转染处理。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-425-5p和TGF-β1的靶向关系。通过博莱霉素(BLM)诱导小鼠增生性瘢痕，然后将小鼠随机分为3组，对照组(NC-agomir)、模型组(NC-agomir+BLM)和转染miR-425-5p干预模型组(miR-425-5p-agomir+BLM),小鼠均治疗21 d。通过Masson三色染色检测HS组织的胶原纤维沉积。通过RT-qPCR和Western blot检测组织和细胞中miR-425-5p、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1和Smad2的表达水平。结果 与正常组相比，HS组的miR-425-5p表达水平降低(t=4.242,P<0.001),而TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.001)。与对照组相比，miR-425-5p-mimic组的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1和Smad2的mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与control组相比，miR-425-5p-inhibitor组的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1和Smad2的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与miR-425-5p-mimic共转染后，TGF-β1-3′-UTR-WT组的相对荧光素酶活性比TGF-β1-3′-UTR-MUT组降低(P<0.05)。与miR-425-5p-mimic+NC-pcDNA3.1组相比，miR-425-5p-mimic+TGF-β1-pcDNA3.1组的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1和Smad2的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与NC-agomir+BLM组相比，miR-425-5p-agomir+BLM组的相对胶原蛋白含量降低(P<0.05),miR-425-5p表达水平升高，而TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论 miR-425-5p在HS组织中表达下调，上调miR-425-5p通过抑制TGF-β1/Smad2信号通路抑制胶原沉积和HS形成。

• 单位
  西安交通大学第一附属医院; 西安医学院第二附属医院