锤头状核酶对转化生长因子β1 RNA的体外剪切作用

作者：刘芳; 邹萍; 吴耀辉; 易雪

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2006, (01): 59-62.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2006.01.010

• 转化生长因子β1
• 核酶
• 体外剪切

为研究转化生长因子β1(TGFβ1)在造血调控中的关键作用,构建针对抗转化生长因子β1的锤头状核酶,并对它的体外剪切活性进行探讨.TGFβ1 cDNA部分基因片段其克隆入T载体中,32P标记TGFβ1体外转录物,变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化获得靶RNA.计算机设计抗TGFβ1的锤头状核酶,并把合成的核酶基因片段克隆入pGEM-9Zf(-)中T7启动子的下游,凝胶电泳纯化回收32P标记核酶的体外转录物.在不同条件下进行核酶的剪切反应,变性PAGE,放射自显影.活性的Rz445在37℃时具有良好活性,Km为29.55 nmol/L,Kcat为0.1533 min-1;突变型核酶Rz445m没有剪切活性.制备的Rz445在体外具有良好的特异催化剪切活性,并有望胞内抑制TGFβ1表达,从而在干细胞移植中应用.

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院