汉滩病毒糖基化位点全突变重组假病毒的制备及鉴定

作者：柯彬彬; 张亮; 何娜; 于澜

来源：中国病原生物学杂志, 2016, 11(03): 204-208.

DOI：10.13350/j.cjpb.160303

• 汉滩病毒
• 包膜糖蛋白
• 糖基化位点全突变体
• 重组假病毒

目的构建汉滩病毒(HTNV)包膜糖蛋白(GP)糖基化位点全突变重组假病毒。方法应用一次性多位点突变技术同时突变HTNV GP上5个N-糖基化位点(Gn的N134、N235、N347、N399和Gc的N928),克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染293T细胞,包装出重组假病毒颗粒,感染HEK293细胞,采用免疫荧光法检测和鉴定构建的重组假病毒。结果基因序列测定显示,突变体上5个N-糖基化位点均由天冬酰胺(Asn)的编码基因(AAT)突变为谷氨酰胺(Gln)的编码基因(CAG);制备的重组假病毒滴度为4.0×107 TU/ml;免疫荧光检测显示构建的重组假病毒可正确表达HTNV的Gn和Gc蛋白。结论成功构建了含有HTNV包膜糖蛋白5个N-糖基化位点全突变的重组假病毒颗粒,为研究糖基化对HTNV包膜糖蛋白生物学功能的影响创造了条件。

• 单位
  第四军医大学