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摘要
为了建立鹿结核病的快速检测方法，试验采用亲和层析方法纯化梅花鹿血清IgG,并免疫兔，制备兔抗梅花鹿IgG抗体，辣根过氧化物酶(HRP)进行标记，通过ELISA和Western-blot对HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体进行鉴定。同时合成结核分枝杆菌38 ku基因，并与pET-22b(+)质粒连接，转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，诱导表达和纯化38 ku蛋白，以38 ku蛋白作为包被抗原，以HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体作为二抗，建立间接ELISA方法。利用建立的间接ELISA方法对结核菌素皮肤试验检出的20份阴性血清和10份阳性血清进行验证。结果表明：对梅花鹿血清IgG进行纯化，得到大小分别约为50 ku和25 ku的蛋白质；制备的HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体可特异性识别梅花鹿血清IgG,在抗体浓度稀释比例为1∶20 000时仍有很好的结合效果；38 ku蛋白作为抗原的最佳包被浓度为1μg/mL,被检梅花鹿血清的最佳稀释比例为1∶100,HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体的最佳稀释比例为1∶10 000;间接ELISA方法能够准确区分结核菌素皮肤试验确定的阳性和阴性梅花鹿血清。说明试验建立的间接ELISA方法能够作为鹿结核病血清学快速检测的有效方法，弥补了传统方法的不足。
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