组蛋白脱乙酰酶6抑制剂Tubastatin A对人皮肤成纤维细胞增殖和运动的影响及其分子机制

作者：张灿; 张琼; 张均辉; 王凡; 张家平^*

来源：中华烧伤杂志, 2021, 37(09).

• 细胞增殖
• 细胞运动
• 组蛋白脱乙酰酶6
• Tubastatin A
• 人皮肤成纤维细胞
• 胞外信号调节激酶1/2

目的探讨组蛋白脱乙酰酶6(HDAC6)抑制剂Tubastatin A对人皮肤成纤维细胞(HSF)增殖及运动性的影响及其可能的分子机制。方法采用实验研究方法。取对数生长期HSF, 按随机数字表法分为阴性对照组及1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组。阴性对照组加入含终体积分数0.1%二甲基亚砜的DMEM培养液(以下简称完全培养液), 其余3组分别加入含相应终物质的量浓度Tubastatin A的完全培养液。常规培养24 h后, 采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和5-乙炔基-2’’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色检测细胞增殖活力;在活细胞工作站下观察细胞3 h内运动范围, 计算细胞曲线运动速度;采用蛋白质印迹法检测胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的蛋白表达量, 并计算p-ERK1/2与ERK1/2比值, 以此表示ERK1/2活性。CCK-8法行细胞增殖活力检测样本数为6, 其余实验样本数为3。对数据行单因素方差分析及LSD检验。结果培养24 h后, CCK-8法和EdU染色显示, 与阴性对照组比较, 1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力均显著下降(P<0.01)。培养24 h后, CCK-8法显示, 与1 μmol/L Tubastatin A组比较, 10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力显著下降(P<0.05);EdU染色显示, 与1 μmol/L Tubastatin A组比较, 5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力显著下降(P<0.05或P<0.01)。观察3 h内, 1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞运动范围较阴性对照组明显缩小。观察3 h内, 阴性对照组细胞曲线运动速度为(0.780±0.028)μm/min, 明显快于1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞的(0.594±0.023)、(0.469±0.028)、(0.391±0.021)μm/min(P<0.01);1 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度明显快于5 μmol/L Tubastatin A组和10 μmol/L Tubastatin A组(P<0.01);5 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度明显快于10 μmol/L Tubastatin A组(P<0.05)。培养24 h后, 与阴性对照组比较, 1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降(P<0.01);与1 μmol/L Tubastatin A组比, 5 μmol/L Tubastatin A组和10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降(P<0.01);与5 μmol/L Tubastatin A组比较, 10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降(P<0.05)。结论 HDAC6抑制剂Tubastatin A可能通过抑制ERK1/2活性, 从而抑制HSF增殖及运动。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 第三军医大学; 第一附属医院整形外科