人Makorin环指蛋白1基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

作者：刘涛; 石艳艳; 袁成福; 张琴; 卜友泉; 易发平; 刘革力; 宋方洲

来源：中国生物制品学杂志, 2009, 22(05): 443-447.

DOI：10.13200/j.cjb.2009.05.24.liut.002

• Makorin环指蛋白1基因
• 短发夹RNA
• 真核表达质粒
• 人端粒酶逆转录酶

目的构建人Makorin环指蛋白1(MKRN1)基因shRNA真核表达质粒,并检测其对HEK293细胞MKRN1基因表达的影响。方法设计并合成特异性针对人MKRN1基因的小干扰片段,定向克隆至带有卡那霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pGenesil-1中,对重组质粒进行酶切鉴定及DNA序列分析,并用脂质体将其转染到HEK293细胞中,观察其对细胞MKRN1基因mRNA转录和蛋白表达水平的影响。结果经酶切鉴定和序列分析证明,3个人MKRN1基因shRNA真核表达质粒及其阴性对照质粒构建正确,转染HEK293细胞后,3个shRNA真核表达质粒在mRNA水平对细胞MKRN1基因的抑制率分别为52.4%、26.2%和42.9%,在蛋白水平对细胞MKRN1基因的抑制率分别为69.1%、27.9%和50.0%。结论已成功构建了人MKRN1基因的shRNA真核表达质粒,为进一步研究MKRN1基因的功能及其与人端粒酶逆转录酶的关系奠定了基础。

• 单位
  重庆医科大学