慢病毒介导的shRNA靶向干扰NSD2三阴乳腺癌稳定细胞株的建立

作者：刘秀敏; 潘云; 宁春萌; 高波^*

来源：临床与病理杂志, 2019, 39(11): 2349-2355.

• NSD2
• 三阴乳腺癌
• RNA干扰
• 慢病毒

目的:构建针对核受体结合SET结构域蛋白2(nuclearreceptorbindingSETdomainprotein2,NSD2)的短发夹干扰RNA(shorthairpinRNA,shRNA)慢病毒干扰载体,建立稳定干扰NSD2基因的MDA-MB-231三阴乳腺癌细胞株。方法:构建2条针对人源NSD2基因的shRNA(shNSD2-1#和shNSD2-2#),连接到慢病毒载体(pGLV10/U6/RFP/Puro)并进行测序鉴定。将NSD2shRNA慢病毒载体与包装质粒共转染到293T细胞,慢病毒包装后进行滴度检测。将包装好的慢病毒转染至三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞中,嘌呤霉素筛选建立稳定转染NSD2 shRNA的细胞株。采用real-time PCR检测NSD2mRNA的表达变化,蛋白质印迹法检测NSD2及其特异性催化的组蛋白甲基化标志物H3K36me2蛋白水平的表达变化。结果:成功构建两个NSD2 shRNA慢病毒干扰载体;与阴性对照组相比,shNSD2-1#组和shNSD2-2#组MDA-MB-231细胞中NSD2 mRNA和蛋白水平均显著下调,NSD2催化的H3K36me2蛋白表达也随之下调。结论:本研究成功建立了shRNA慢病毒载体介导的稳定敲低NSD2的MDA-MB-231细胞株,证实干扰NSD2基因表达能有效抑制其对组蛋白H3K36的甲基化作用,为进一步研究NSD2在乳腺癌中的作用机制奠定了基础。

• 单位
  基础医学院; 大理大学第一附属医院; 大理大学