重组腺病毒载体敲减ApoE-/-小鼠血管平滑肌细胞Orai1基因模型的构建

作者：费舒扬; 葛长江^*

来源：心肺血管病杂志, 2021, 40(03): 281-286.

• Orai1基因
• 动脉粥样硬化
• 核糖核酸干扰
• 血管平滑肌细胞

目的:为探讨Orai1基因在动脉粥样硬化进展中的作用,通过重组腺病毒载体建立ApoE-/-小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Orai1基因的敲低模型,为深入相关研究奠定基础。方法:构建针对小鼠Orai1基因的重组腺病毒载体。高脂饲养ApoE-/-小鼠至16周龄后处死。取胸主动脉原代VSMCs改为体外培养,细胞分为三组,分别为shOrai1组、shNC组和对照组。转染后通过实时定量聚合酶链式反应(qPCR), Western blot检测Orai1表达水平,同时对转染模型进行验证。结果:qPCR示,重组腺病毒在ApoE-/-小鼠VSMCs中Orai1基因的干扰效率达57%,Western blot结果示,Ad-GFP-Orial-shRNA转染组Orai1蛋白表达水平显著降低。结论:通过成功建立ApoE-/-小鼠VSMCs中Orai1基因敲低模型,从而为阐明钙库操纵性钙通道在动脉粥样硬化进程中的作用,尤其关于斑块延展和不稳定的相关性研究奠定了基础。

• 单位
  首都医科大学附属北京安贞医院; 首都医科大学; 北京市心肺血管疾病研究所