SRPK1基因对膀胱癌细胞生物学行为的影响及机制研究

作者：苗龙; 曹希亮^*; 刘万启; 高超; 孙方浩; 娄禄; 魏晋

来源：国际泌尿系统杂志, 2023, 43(01).

• 膀胱肿瘤
• 丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1
• 细胞增殖
• 细胞运动

目的观察丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1(SRPK1)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响, 并进一步探究其分子机制。方法利用Oncomine癌症数据库分析SRPK1基因在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达;构建SRPK1特异的慢病毒干扰质粒(sh1和sh2)和阴性对照质粒(NC), 包装慢病毒颗粒, 分别感染T24细胞和5637细胞。设空白对照组(T24和5637)、阴性对照组(T24/NC和5637/NC)、干扰组1(T24/sh1和5637/sh1)和干扰组2(T24/sh2和5637/sh2);采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中SRPK1 mRNA和蛋白水平的表达变化;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化;采用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化;采用Western blot检测各组细胞上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白表达变化。结果 Oncomine癌症数据库中SRPK1 mRNA在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织(P<0.001)。通过qRT-PCR和Western blot检测结果显示病毒感染后的细胞SPRK1在mRNA和蛋白水平均明显下调;在慢病毒感染后的T24细胞中, 第3～5天干扰组的吸光度值均低于阴性对照组, 差异有统计学意义(均P<0.05);在慢病毒感染后的5637细胞中, 第2～5天干扰组的吸光度值均低于阴性对照组, 差异有统计学意义(均P<0.05);Transwell细胞迁移和侵袭实验显示:与阴性对照组比较, 干扰组的迁移和侵袭的膀胱癌细胞数目均明显减少, 差异均有统计学意义(均P<0.05);Western blot结果显示, 与阴性对照组比较, 干扰组的E-cadherin表达量增加, 而N-cadherin和vimentin的表达明显减少, 同时AKT通路蛋白p-AKT及p-GSK3β明显下调, 差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 SRPK1基因在膀胱癌组织中高表达, 下调SRPK1的表达可抑制膀胱癌细胞的增殖, 并降低膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。

• 单位
  徐州市第一人民医院