屎肠球菌纤维素结合域谷氨酸脱羧酶构建及其酶学性质

作者：杨胜远^*; 林谦; 赖丽萍; 黄婷婷

来源：食品与发酵工业, 2019, 45(21): 22-30.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020312

• 纤维素结合域
• 屎肠球菌
• 谷氨酸脱羧酶
• 表达
• 酶学性质

为了开发可用于高效固定化的优质谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD,EC 4. 1. 1. 15),以Enterococcus faecium GDMCC60203为gad B基因供体,对纤维素结合域(cellulose-binding domain,CBD) GAD融合酶(CBD-GAD)的构建及其酶学性质进行了探讨。结果显示:构建的含pRPOCB-Efagad B重组质粒的Escherichia coli GDMCC 60445可高效表达CBD-GAD,120 m L发酵液制备的纤维素固定化CBD-GAD的活力为(347. 93±27. 63) U/g;在无氨苄青霉素LB培养基中连续培养5批,E. coli GDMCC 60445仍可稳定表达CBD-GAD;经一步纯化,CBD-GAD在SDS-PAGE电泳上呈单一条带,分子质量约为74. 02 k Da; CBD-GAD最适反应p H和温度分别为4. 6和60℃,在p H 4. 8～5. 6和4～40℃较稳定,仅对L-谷氨酸具有催化活性,Km和Vmax分别为10. 58 mmol/L和3. 83μmol/(m L·min),其催化反应不受底物和产物抑制。重组菌株稳定,CBD-GAD酶学性质优良,有望应用于γ-氨基丁酸和D-谷氨酸工业化生产。

• 单位
  玉林师范学院; 化学化工学院; 岭南师范学院