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摘要
为了改造黑曲霉（Aspergillus niger）来源的β-甘露聚糖酶ManA，获得耐热性高的突变体。利用易错聚合酶链式反应（PCR）技术对构建的表达质粒pGAPZαA-manA进行随机突变，将突变文库转化至毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115，表达筛选耐热性高的突变体，并进一步对突变位点进行定点突变，筛选其他耐热性高的突变体。结果表明，ManA的H283R与H283K突变体相对于野生型在耐热性方面有显著提升，75℃加热30 min其相对酶活由26.66%分别提升至76.95%和83.57%；在pH 3.0～9.0的条件下，50℃保存24 h,H283K突变体与野生型的相对酶活均在90%以上，H283R突变体在pH 3.0时的相对酶活下降到了84.72%，两个突变体的最适温度、pH及比酶活与野生型没有明显差异。说明β-甘露聚糖酶ManA的283位组氨酸（H283）对其耐热性较为关键，将该位点突变为精氨酸（R）和赖氨酸（K）时，ManA的耐热性得到显著提升。
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单位河南省科学院生物研究所有限责任公司
