猪乳头瘤病毒荧光定量PCR检测方法的建立

作者：张昕宇; 李玉莹; 雷晓哓; 赵宸辰; 黄海鑫; 汪伟; 郑敏; 孙文超^*; 兰添^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(01): 23-28.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0005

• 猪乳头瘤病毒
• 实时荧光定量PCR
• 快速检测

为建立可以快速检测猪乳头瘤病毒(SsPV)的方法，根据SsPV E2基因的保守序列设计引物，利用普通PCR方法扩增SsPV E2保守基因片段，将其克隆到pMD18-T载体，构建重组质粒pMD18-T-SsPV作为标准品质粒，经实时荧光定量PCR(qPCR)条件优化后，进行特异性、灵敏性和重复性试验。结果显示，所建立的qPCR方法在7.2×101～7.2×108 copies/μL模板浓度区间内与Ct值呈现良好的线性关系，检测下限为7.2×100copies/μL，灵敏度比普通PCR高100倍；与猪德尔塔冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪捷申病病毒、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒4型无交叉反应；该方法组内变异系数和组间变异系数均小于2.0%；对44份猪皮肤组织样品进行检测，检测阳性率为2.27%，普通PCR检测阳性率为0%。综上所述，本试验成功建立了SsPV qPCR检测方法，为SsPV的快速检测提供了可靠方法。

• 单位
  广西壮族自治区动物疫病预防控制中心; 温州大学