基于特征蛋白的僵蚕配方颗粒鉴定方法

作者：刘姣; 蒋超; 黄凯伟; 李洁; 赵玉洋^*; 金艳; 张恬; 张辉; 袁媛^*

来源：中国现代中药, 2023, 25(08): 1692-1700.

DOI：10.13313/j.issn.1673-4890.20221115003

• 僵蚕配方颗粒
• 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 质量检测

目的：为保障临床用药的安全性和有效性，建立僵蚕配方颗粒的鉴定方法。方法：采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，分离不同加工方式的僵蚕样品蛋白，对提取方法、缓冲液pH、料液比、反应温度、反应时间、专属性、适应性进行考察。同时利用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析寻找稳定且丰度较高的蛋白作为鉴定僵蚕配方颗粒的蛋白标志物。结果：SDS-PAGE最佳提取条件为取僵蚕样品适量，按料液比1∶10加入0.1 mol·L–1 NaAc缓冲液(pH=5),30℃振荡提取1.5 h。可分离出特征性条带约40～50 kDa，该条带主要为僵蚕基原动物家蚕Bombyx mori Linnaeus的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白、抗糜蛋白和抗胰蛋白等，可作为僵蚕鉴别的蛋白标记。根据SDS-PAGE分析条带的相对分子质量大小、蛋白在僵蚕药材和提取物中的特异性和稳定性，确定Serpin类丝氨酸蛋白酶抑制剂为鉴定僵蚕配方颗粒的特异性蛋白。结论：基于差异蛋白建立了可用于僵蚕配方颗粒生成过程的质量控制、僵蚕配方颗粒的SDS-PAGE蛋白鉴定的指纹图谱方法。

• 单位
  中国中医科学院