RFWD3基因重组慢病毒表达载体的构建及RFWD3蛋白在宫颈癌细胞中的功能验证

作者：朱晨艳; 徐静云; 丁祥亚; 卢春^*

来源：中国临床研究, 2020, 33(08): 1009-1013.

DOI：10.13429/j.cnki.cjcr.2020.08.001

• 环指与WD重复结构域蛋白
• 宫颈癌
• HeLa细胞
• 慢病毒
• 增殖
• 迁移

目的构建E3泛素化连接酶环指与WD重复结构域蛋白(RING finger and WD repeat domain,RFWD3)的慢病毒表达载体,研究RFWD3对宫颈癌细胞增殖与迁移能力的影响。方法以宫颈癌HeLa细胞的cDNA为模板扩增RFWD3基因片段,利用DNA重组技术,将上述片段克隆至慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP(简称pCDH)中,构建pCDH-RFWD3重组真核表达质粒。经酶切及测序验证准确后,采用三质粒慢病毒包装系统包装RFWD3病毒,通过梯度稀释法感染人胚肾上皮细胞(293T)检测病毒滴度。随后采用RFWD3慢病毒液感染宫颈癌HeLa细胞,运用Western blot实验检测慢病毒转导后HeLa细胞中RFWD3蛋白的表达水平,进一步通过CCK-8和细胞划痕实验检测过表达RFWD3蛋白对HeLa细胞增殖与迁移能力的影响。结果可表达RFWD3蛋白的pCDH-RFWD3慢病毒载体获成功构建。包装RFWD3慢病毒,建立稳定表达RFWD3蛋白的宫颈癌HeLa细胞系。RFWD3慢病毒转导后的HeLa细胞与对照细胞相比,其细胞增殖与迁移能力显著增强(P<0.05)。结论 RFWD3能够显著增强宫颈癌HeLa细胞的增殖与迁移能力。

• 单位
  南京医科大学