科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的通过研究大鼠骨髓内皮祖细胞转染PAX6基因后角膜内皮细胞相关特征性基因的表达,探讨其作为角膜内皮细胞移植的种子细胞的可能性。方法采用密度梯度离心法分离出大鼠骨髓单核细胞,接种到纤连蛋白铺层的细胞皿,以EGM-2培养液选择培养,获得大鼠骨髓内皮祖细胞。通过免疫荧光染色检测CD31、CD34、CD133、LDL、UEA-1等骨髓内皮祖细胞基因表达情况;病毒转染PAX6基因进入内皮祖细胞,蛋白免疫印迹鉴定转染成功与否;实时荧光定量PCR检测AQP-1、ZO-1、ATP1A1、SNAI1、SNAI2角膜内皮细胞相关特征性基因的表达情况。结果分离获得的细胞在选择培养基中形成类铺路石样克隆,细胞间连接紧密,荧光染色显示内皮祖细胞基因表达且PAX6基因可被成功转染,实时荧光定量PCR检测显示转染后的细胞角膜内皮细胞功能性蛋白基因表达上升,纤维化蛋白基因表达下降。结论大鼠骨髓内皮祖细胞通过过表达PAX6基因可被诱导向角膜内皮细胞转分化,转染后的细胞具有作为角膜内皮细胞移植种子细胞的潜力。
- 单位
