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摘要
目的克隆弓形虫上海SHR株SRS20A基因，构建原核表达体系，通过诱导表达和蛋白纯化，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，对蛋白进行特征化鉴定。方法采用PCR技术扩增弓形虫SRS20A基因，克隆至原核表达载体pET-30a（+）中，转化大肠埃希菌（E.coli），IPTG诱导目的蛋白表达，采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，使用弓形虫阳性血清检测SRS20A蛋白的反应原性，应用纯化的rSRS20A蛋白通过ELISA方法对猪临床样品进行检测，利用Westernblot技术检测多克隆抗体与弓形虫天然蛋白的反应性，通过间接免疫荧光观察SRS20A蛋白在虫体内的定位情况。结果成功从弓形虫基因组中扩增出SRS20A目的基因，构建了pET-30a-SRS20A重组质粒，利用小鼠感染弓形虫的阳性血清可以特异性识别重组蛋白rSRS20A，ELISA试验表明rSRS20A可以与猪临床血清特异性反应，证明SRS20A具有良好的反应原性。制备并获得了抗SRS20A重组蛋白的多克隆抗体，通过Westernblotting可检测出弓形虫天然蛋白SRS20A的特异性条带。通过间接免疫荧光方法鉴定SRS20A蛋白定位在弓形虫速殖子表面。结论通过分子生物学方法鉴定及特征化了一个新的弓形虫速殖子表面抗原SRS20A，为进一步深入研究弓形虫SRS20A功能奠定基础。
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