绵羊痘病毒E3L基因的克隆和表达及其结构分析

作者：于少雄; 颜新敏; 吴国华; 赵志荀; 卢昌; 叶奕优; 朱海霞; 李健; 张强

来源：中国兽医科学, 2013, (09): 924-929.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2013.09.005

• 痘苗病毒
• E3L基因
• 绵羊痘病毒
• 表达
• 结构分析 vaccinia virus
• E3Lgene
• sheeppox virus
• expression
• structure analysis

以绵羊痘病毒古浪株基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得绵羊痘病毒E3L基因,将其克隆至pGEX4T-1表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株为宿主菌进行了诱导表达。结果显示,重组菌可以表达出大小约为46ku的重组融合蛋白,表达的蛋白绝大部分以可溶形式存在于菌体中;表达产物经GST结合树脂纯化后可得到纯度较高的目的蛋白,经Western-blot分析,所纯化的蛋白能与绵羊痘病毒阳性血清进行特异的免疫印迹反应,证明表达的蛋白具有良好的反应原性。用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠获得鼠抗血清,经间接ELISA测定效价为1∶100 000。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室