miRNA-27a靶向SPRY2对退变椎间盘血管长入生成作用的影响

作者：黄启帆; 白杰; 何坤; 王贤; 李浩; 唐上德^*

来源：现代生物医学进展, 2020, 20(21): 4030-4036.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2020.21.006

• microRNA-27a
• SPRY2
• 椎间盘退变
• 侵袭
• 血管形成

目的:探讨miRNA-27a靶向调控Sprouty同源物2(Sprouty Homolog 2, SPRY2)对人髓核细胞系(nucleus pulposus cells,NPCs)诱导人微血管内皮细胞(Human microvascular vascular endothelial cells, HMEC-1)血管生成作用的影响。方法:收集脊柱侧弯和椎间盘退变(Intervertebral disc degeneration, IDD)患者的椎间盘组织分别作为对照组和IDD组,通过miRNA芯片筛选差异表达的miRNA。RT-qPCR和荧光原位杂交实验验证组织中miR-27a的表达水平。慢病毒转染细胞,细胞分为Control组(未转染);NC组(转染慢病毒空载);sh-miR-27a组(转染miR-27a抑制慢病毒);miR-27a组(转染miR-27a过表达慢病毒);SPRY2组(转染SPRY2过表达慢病毒)及miR-27a+SPRY2组(转染miR-27a和SPRY2过表达慢病毒)。RT-qPCR检测髓核细胞中miR-27a和SPRY2的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a和SPRY2的靶向关系。将经过不同处理的髓核细胞条件培养基与完全培养基混合培养HMEC-1细胞,Transwell和管腔形成实验检测HMEC-1细胞的侵袭和血管生成能力。免疫荧光和ELISA检测髓核细胞和混合培养基中转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1, TGF-β1)含量。结果:与对照组椎间盘组织相比,IDD组miR-27a表达明显增加。与NC组相比,SPRY2在sh-miR-27a组中表达升高(P<0.05),miR-27a组中表达降低(P<0.05)。与NC组相比,miR-27a组HMEC-1细胞侵袭和血管生成能力增强(P<0.05),TGF-β1表达上升(P<0.05);SPRY2组HMEC-1细胞侵袭数减少(P<0.05),管腔样结构未形成。与miR-27a组相比,miR-27a+SPRY2组HMEC-1细胞侵袭和血管生成能力下降(P<0.05),TGF-β1表达下降(P<0.05)。结论:miRNA-27a通过靶向抑制SPRY2的表达促进髓核细胞诱导HMEC-1细胞成血管能力。

• 单位
  广东省中医院; 广东省中医院珠海医院