利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制HBV复制

作者：吴涛; 朱小娟; 崔仑标; 樊欢; 陈银; 郭喜玲; 赵康辰; 史智扬; 朱凤才^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2015, 35(08): 600-605.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2015.08.009

• CRISPR/Cas9基因编辑技术
• 乙型肝炎病毒
• 抑制

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对乙型肝炎病毒(HBV)的特定基因进行编辑, 评价其抑制HBV复制的效应。方法针对HBV的S基因设计2套CRISPR/Cas9表达质粒并转染HepG2-N10细胞株。采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞毒性、化学发光法检测HBsAg、荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测病毒mRNA表达水平, 荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测HBV DNA含量, 高通量测序分析HBV基因组编辑情况。结果未见明显细胞毒性效应;2套针对HBV的CRISPR/Cas9表达质粒组培养基中HBsAg含量较对照组降低了24.2%(P=0.031)和16.9%(P>0.05), 细胞中HBsAg含量分别降低了16.4%(P>0.05)和32.1%(P>0.05);S、C、X基因mRNA基因表达呈现不同程度降低;培养上清中HBV DNA含量较对照组降低了23%(P>0.05)和35%(P=0.047), 细胞中HBV DNA含量降低了7.2%(P>0.05)和18%(P>0.05);高通量测序提示HBV基因组出现不同类型的插入/缺失突变。结论针对HBV的S基因设计的2套CRISPR/Cas9表达质粒能通过对HBV基因组的编辑实现抑制HBV基因表达及病毒复制作用, 可能为HBV治疗提供新的途径。

• 单位
  江苏省疾病预防控制中心