大鼠骨髓间充质干细胞分离、体外培养和向软骨细胞表型定向分化的实验研究

作者：丁晓飞; 赵劲民; 陈维平; 杨志; 苏伟

来源：广西医科大学学报, 2004, (02): 179-182.

DOI：10.16190/j.cnki.45-1211/r.2004.02.009

• 间充质干细胞
• 骨髓
• 细胞培养
• 软骨
• 分化
• 体外

目的 :探讨分离骨髓间充质干细胞 (MSCs)并诱导其向软骨细胞转化的体外培养方法 ,为软骨组织工程的种子细胞来源提供实验依据。方法 :抽取大鼠四肢骨髓 ,Percoll梯度分离液离心分离结合贴壁筛选法得到 MSCs,在含 1 5 % FBS的低糖DMEM培养液中 ,置于 37℃ ,5 % CO2 培养箱内培养 1 0～ 1 4 d。传代后以 1 5 % FBS的高糖 DMEM培养液 (含 TGF-β1 1 0μg/L,地塞米松 1 0 - 7mol/L,维生素 C5 0 mg/L)对其进行诱导培养。观测在体外培养条件下 MSCs的形态、生长特点和诱导培养后软骨特异性基质的表达情况。结果 :1分离获取了较高纯度的 MSCs,保持了细胞的活性 ;2 MSCs原代培养呈均匀分布的集落样生长 ,呈长梭形 ;传代培养中形态特性无明显变化 ,细胞增殖周期缩短 ,细胞均质性明显提高 ;3诱导后的细胞由梭形向多角形转变 , 型胶原免疫组化阳性。结论 :1采用 Percoll梯度分离液离心分离结合贴壁筛选法可获得较高纯度和活性的MSCs;2 MSCs在体外培养条件下能大量增殖。通过离体培养 ,可使体内环境下低丰度的 MSCs实现数量扩增 ;3MSCs在特定培养液的诱导下能向软骨细胞表型转化 ,并能分泌软骨特异性基质 ,可成为软骨组织工程理想的种子细胞来源

• 单位
  广西医科大学; 广西医科大学第一附属医院