SARS-CoV-2 Mpro抑制剂筛选体系的构建及临床常用抗病毒中药制剂的初步筛选

作者：韩冰; 张岱; 陈小菲; 李伟霞; 吴娅丽; 王晓艳; 张辉; 汪彬; 蒋雪松; 贾金浩; 纪秋如; 孟高全; 孟伟亭; 王炜^*; 唐进法^*

来源：中药药理与临床, 2023, 1-17.

DOI：10.13412/j.cnki.zyyl.20231120.001

• 新冠病毒
• 主蛋白酶抑制剂
• 荧光共振能量转移
• 抗病毒中药制剂
• 生物探针

目的：利用荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer，FRET)技术构建新冠病毒主蛋白酶(SARS-CoV-2 Mpro)中药抑制剂的体外筛选方法。方法：构建Mpro及筛选探针原核表达的工程质粒pGEX-4T-1-Mpro、pET-28a(+)-Ls-mK。使用荧光探针Ls-mK检测Mpro的生物活性及酶动力学参数，并对筛选条件进行优化。采用阳性药物GC-376及阴性对照PLpro(papain-like protease)和TEV酶(Tobacco Etch Virus Proteinase)评价荧光探针Ls-mK的特异性及检测能力与商业化探针的差异。根据所构建的筛选体系考察五种中药制剂筛选热毒宁注射液、血必净注射液、抗病毒口服液和蒲地蓝口服液对Mpro的抑制能力。结果：本研究成功构建原核表达的工程质粒并获得纯度为90%左右的重组蛋白荧光探针Ls-mK及Mpro。荧光探针Ls-mK可成功产生FRET现象并具有良好的特异性。Mpro具有良好的生物活性。本研究所构建的筛选体系具有与商业化探针相同的检测能力，对五种中药制剂考察发现仅喜炎平注射液对Mpro具有良好的抑制活性，其IC50值为(3.32±0.03)mg/mL。结论：本研究成功构建基于荧光蛋白SARS-CoV-2 Mpro的简便、灵敏和低成本的筛选体系，为新冠病毒主蛋白酶抑制剂的筛选与发现奠定了实验基础。

• 单位
  河南中医药大学; 第一附属医院检验科